Técnicas de PCR para la detección de los genes: gen mecA y gen LPV, responsables de la virulencia del Staphylococcus aureus

Título del Artículo: Portación nasal de Staphylococcus aureus en individuos de la comunidad: factores epidemiológicos.

Objetivo: conocer la situación epidemiológica de una comunidad, que asiste al Centro de Atención Primaria de la Salud y que corresponde a la localidad de Sa. Pereira ubicada a 60 km al oeste de la ciudad de Santa Fe - Argentina, determinar la prevalencia de portadores nasales de S. aureus y sus respectivos patrones de resistencia antimicrobiana, estudiar por técnicas de Biología Molecular (PCR) las cepas SAMR aisladas, para confirmar su resistencia a meticilina, con la detección de gen mec A y presencia de gen pvl, que codifica el factor de virulencia leucocidina de Panton y Valentine y analizar la asociación de SAMR con factores de riesgo y patologías.

Muestra: hisopado de fosas nasales

Extracción del ácido nucléico: DNA cromosómico bacteriano

Pasos para la extracción

• Lisis: ebullición 15min.
• Separación: centrifugación 5min.
• Purificación: se utiliza el sobrenadante como templado.

Gen amplificador:

• gen mecA
• gen pvl
• gen 16S rRNA

Tipo de PCR: 

PCR múltiplex

                                                Temperatura                           Tiempo

• Desnaturalización:         94ºC                                      30seg
• Hibridación:                     52ºC                                     30seg
• Extensión:                         72ºC                                     30seg

Ciclos: 30 ciclos

Visualización: Electroforesis

Portación nasal de Staphylococcus aureus en individuos de la comunidad: factores epidemiológicos