Técnicas de PCR para la detección de los genes: gen mecA y gen LPV, responsables de la virulencia del Staphylococcus aureus

Título del Artículo: Portación nasal de Staphylococcus aureus en individuos de la comunidad: factores epidemiológicos.

Objetivo: conocer la situación epidemiológica de una comunidad, que asiste al Centro de Atención Primaria de la Salud y que corresponde a la localidad de Sa. Pereira ubicada a 60 km al oeste de la ciudad de Santa Fe - Argentina, determinar la prevalencia de portadores nasales de S. aureus y sus respectivos patrones de resistencia antimicrobiana, estudiar por técnicas de Biología Molecular (PCR) las cepas SAMR aisladas, para confirmar su resistencia a meticilina, con la detección de gen mec A y presencia de gen pvl, que codifica el factor de virulencia leucocidina de Panton y Valentine y analizar la asociación de SAMR con factores de riesgo y patologías.

Muestra: hisopado de fosas nasales

Extracción del ácido nucléico: DNA cromosómico bacteriano

Pasos para la extracción

• Lisis: ebullición 15min.
• Separación: centrifugación 5min.
• Purificación: se utiliza el sobrenadante como templado.

Gen amplificador:

• gen mecA
• gen pvl
• gen 16S rRNA

Tipo de PCR: 

PCR múltiplex

                                                Temperatura                           Tiempo

• Desnaturalización:         94ºC                                      30seg
• Hibridación:                     52ºC                                     30seg
• Extensión:                         72ºC                                     30seg

Ciclos: 30 ciclos

Visualización: Electroforesis

Portación nasal de Staphylococcus aureus en individuos de la comunidad: factores epidemiológicos

Mecanismos moleculares de la Neumonía provocada por Streptococcus pneumoniae

Pruebas de Screening y Confirmatorias

PRUEBAS DE SCREENING O DE TAMIZAJE

Este tipo de pruebas determina el padecimiento de Neumonía, pero no nos permite conocer a cerca del agente causal definitivo de la misma. Dentro de los exámenes realizados se recurre a una RADIOGRAFÍA DE TÓRAX, pues los síntomas que se presenta son: tos productiva, fiebre y dolor pleurítico.

Esta prueba presenta infiltrados pulmonares con tres patrones según el patógeno responsable:

• Neumonía típica: se asocia a infección por neumoncoco, Haemophylus influenzae, S. aureus y Klebsiella pneumoniae. El cuadro clínico presenta un inicio brusco, con fiebre y esputo purulento, con dolor torácico.
• Neuomía atípica: producida por virus y algunas bacterias como Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia spp, Coxiella burnetti.  Los síntomas aparecen progresivamente, hay tos seca, cefalea y astenia.
• Neuomnía mixta: por Legionella pneumonphila, existencia de tos seca, astenia y síntomas abdominales, la clínica evoluciona y hay presencia de fiebre alta, disnea, dolor pleurítico y afectación neurológica.

PRUEBAS CONFIRMATORIAS

Permiten conocer definitivamente al agente causal de la neumonía, se procede a realizar un HISOPADO DE LAS FOSAS NASALES, el procedimiento es el siguiente:

• Se toma muestras nasales utilizando hisopos de algodón estériles. El hisopo se rota dentro de las fosas nasales, tres veces en sentido de las agujas del reloj y tres veces en sentido contrario. Luego se colocó en medio de transporte de Stuart, conservando en hielo (4 °C) hasta su traslado al laboratorio. 
• Se inocula en placas de agar manitol salado y se incubaron a 35 °C por 48 h. Las colonias manitolsal positivas se subcultivaron en agar nutritivo a 35 °C por 24-48 h, al término de las cuales se realizaron extendidos que fueron coloreados con Gram. 
• A aquellas colonias que presentaron morfología microscópica de cocos grampositivos, se les realizó prueba de catalasa y coagulasa en tubo. 
• Se completó la identificación de S. aureus con: prueba de crecimiento en anaerobiosis, Voges Proskauer, sensibilidad a novobiocina, fosfatasa alcalina, ureasa, ácido (en aerobiosis) a partir de trehalosa y manosa y ornitina descarboxilasa.

 

Portación nasal de Staphylococcus aureus en individuos de la comunidad: factores epidemiológicos

Diplomado en Enfermeria/ats Del Consorcio Hospital General Universitario de Valencia. Temario Volumen Ii Ebook

Alteraciones en la traducción de la proteina PVL del S. aureus

La proteína PVL es una leucocidina formadora de poros, esta codificada en dos genes : lukS y luckF, los cuales se ubican en un fago móvil y este al ser inducidos por otra proteína, la Hemolisina gamma traducen mayor cantidad de PVL. El aumento de las PVL conduce a un mayor daño a las celulas incluidos los eritrocitos, neutrófilos y macrofagos, las cuales terminan haciendo lisis lo cual lleva a una neumonía hemorragica severa.

Características generales del Staphylococcus aureus

Resistencia a los antibióticos del Staphylococcus aureus producto de una alteración en la transcripción de proteínas de membrana

Desde su descubrimiento esta bacteria ha sido capaz de mutar y adquirir resistencia a varios medicamentos. En las últimas décadas se ha tratado al Staphylococcus aureus mediante la Vancomicina, pero este ha adquirido resistencia a la misma pues en una infección mixta con Enterococcus faeccalis, poseedor del gen de la resistencia en el transposón TN1546 de un plásmido, se produjo una trasferencia del plásmido. DNA del S.aureus se convinó con este plámido y sufrió una trasformación para así ser capaz de trascribir una nueva enzima B-lactamasa que inhibe a la vancomicina.

Infecciones producidas por Staphylococcus aureus

Factores de riesgo

La bacteria Staphylococcus aureus es la causante de la Neumonía Necrotizante o Adquirida en la comunidad, considerandose un patógeno nosocomial que coloniza la piel, e induce su autoinoculación en la cavidad nasal. Induce una respuesta inmunitaria que estimula la producción de anticuerpos, dando lugar a síntomas alérgicos. Si el paciente entra en un periodo de inmunodeficiencia, la bacteria se activara y producirá infecciones al diseminarse por el organismo con mayor facilidad llegando así a los pulmones. 

Portación nasal de Staphylococcus aureus en individuos de la comunidad: factores epidemiológicos